伊丽莎白女王在OT-1阶段作战测试期间搭载了6架英国的F-35B飞机。三架来自第617中队，从皇家空军马勒姆飞越大西洋(BK-14/ZM148、BK-15/ZM149和BK-17/ZM151)；另外三架(BK-01/ZM135、BK-02/ZM136和BK-04/ZM138)来自加州爱德华兹空军基地的第17测试和评估中队。第17中队也是作战测试的负责单位。布莱克莫尔说，在2018年固定翼的FOCFT期间，OT-1阶段已经建立了一个扩展的作战包线，强调的是首尾相连的测试：“这是关于能够在72小时内完成任务要求，任务计划中包含所有正确的数据源和情报，然后策划、做简报，作为一个可靠的集和安全起飞，执行任务，在空中进行一些初步的战斗损伤评估，安全降落，从飞机上提取信息，进行总结汇报，然后反馈给你下一步的行动。
这不仅仅是关于飞机任务的首尾相连，你还需要测试这些不同的支撑结构是如何组合在一起的，最终将一架武装飞机送离甲板。我们的飞机很好的维持了我们的支援能力。例如，F-35自主后勤信息系统就是一个真正的成功案例。我们达到了所需的所有测试点，而且我们在整个测试过程中都拥有100%的可靠性。”
作为OT-1阶段测试的一部分，F-35B挂载了铺路IV精确制导炸弹。
“WESTLANT 19”演习见证了7名英国闪电部队飞行员获得昼间航母期间资格，其中两名还获得夜间起降资格。
OT-1期间共飞行66架次，共计75个飞行小时。七名英国闪电部队飞行员获得了日间航母资格认证，其中两名也获得了夜间资格。五周OT-1期间的作战试飞确保了航母资格认证大纲，证明了F-35B可以在打击群内作战，并证明了与其它舰艇单位(例如，45型驱逐舰的Link 16网络)进行互通性操作的能力。布莱克莫尔说，这些都是我们希望从作战测试中得到的重大成果，我们也实现了这些目标。“头条新闻是，我们相信，根据空战中心将要做的所有评估，我们飞行了所有需要的架次，为初始作战能力的声明提供证据。”
大多数的飞行是以双机编队展开的，尽管在OT-1阶段末期进行了一次四机编队起飞和回收。布莱克莫尔说，我们能够做的是评估飞机起飞和回收之间的时间间隔。“这一切都证实了我们之前在模拟器中所能做的。这是不错的进展，因为现在我们已经很好地理解了自己撰写的作战概念，以及我们在航母内外驾驶F-35的方式。我们也许不应该感到惊讶，因为这艘船和飞机的设计就是为了相互配合。但这是很好的现场测试，并在(OT-1阶段)结束时以一支四机编队离舰达到高潮。”
与OT-1阶段的后半部分重叠，VMX-1中队的两架F-35B(BuNo 169592/VM-31和169593/VM-32)在伊丽莎白女王的甲板上执行“飞到”操作，包括与英国飞机展开编队飞行。这标志着美国海军陆战队飞行员“教育”进程的开始，最终将让VFMA-211中队作为CSG-21大队的一部分出海部署。虽然VMX-1中队并没有在船上“过夜”，但该航母搭载了一组由12名美国海军陆战队人员组成的小组，他们由飞行工程师、维修人员和着舰信号官组成，以支持一体化。布莱克莫尔上尉说，这意味着在两周的时间里，海军陆战队VMX-1中队的F-35B能够降落到舰上，飞行员和着舰信号官都能够了解伊丽莎白女王级航母。“他们都取得了昼夜起降的航母资格认证，而且看到他们的大部分程序与我们非常相似。一体化不是问题。”
在2020年10月举行的“联合勇士20-2”演习期间，所有九艘舰艇组成了北海的航母打击群。
“联合勇士20-2”演习中登上伊丽莎白女王号的F-35B包括了VMFA-211中队(尾码CF)的169620/00、169621/0、169587/02、169588/03、169589/04、169607/06、169608/07、169610/08、169614/09、169414/25以及第617中队的ZM146/012、ZM150/016、ZM151/017、ZM152/018号机。
乌特利少将称，“WESTLANT 19”演习期间取得的成果让人们对伊丽莎白女王号上的F-35B作业充满信心：“我们可以支持它们，我们可以给它们挂弹，我们可以让它们离开航母，当它们回来时，我们还可以继续支持它们。”当我说支持的时候，这对第五代喷气式飞机来说比过去拥有更多的意义。我们可以上传和下载任务数据，从后勤角度支持闪电部队。“这不仅仅是在航母上驾驶飞机。这意味着我们开始意识到自己将从第五代航母和5代机上获得的能力。”
布莱克莫尔上校补充道：“从英国的角度来看，我们在问‘我们能从海上完成核心任务吗？’乍一看，我们觉得自己已经攻破了这些难关，我们处于一个很好的位置，可以在2020年进行兵力生成，然后进入CSG-21大队的组建。这给了我们充分的信心，(2020年)在基本海上作战训练(BOST)和团体演习(GROUPEX)之前让第617中队上船，并在美国海军陆战队登船之前使航母作业正常化。”
F-35B 169608/CF-07离开伊丽莎白女王号时，借助发动机喷嘴向下提供的额外升力使其离开甲板。
